液相色譜儀由高壓液體泵、檢測器及液相色譜柱等三部分組成，其中液相色譜柱的正確安裝和使用，是液相色譜工作的關(guān)鍵；也是液相色譜工作者獲得正確可靠的實驗數(shù)據(jù)的必經(jīng)之路。一、液相色譜柱的安裝：
1、液相色譜柱的結(jié)構(gòu)：
a、空柱由柱接頭、柱管及濾片組裝而成。
柱接頭采用低死體積結(jié)構(gòu)，柱接頭是兩端螺紋組件，一端是為7/16英寸外螺紋，另一端是3／16英寸的內(nèi)螺紋(國內(nèi)外已規(guī)范化)。7／16英寸外螺紋與1／4英寸柱管(Φ6.35mm)連接，中間放置壓壞用于密封。3／16英寸的內(nèi)螺紋與1／16英寸(Φ1.57mm)的連接管連接，中間也放置壓環(huán)用于柱接頭的密封。為了盡量減少柱外死體積，在安裝色譜柱時，用Φ1.57mm連接管通過空心螺釘壓環(huán)后要盡量插到底，然后再擰緊空心螺釘。壓環(huán)被空心螺釘擠壓變形后緊箍在連接管上(連接管通過壓環(huán)后露出的管長度應(yīng)嚴(yán)格控制在2．5mm長或其他固定尺寸)。
在兩端柱接頭內(nèi)，柱管兩端各放置一片不銹鋼濾片(或濾網(wǎng))，用于封堵柱填料不被活動相沖出柱外而流失?？罩鹘M件均為316#不銹鋼材質(zhì)，能耐受一般的溶劑作用。但由于含氯化物的溶劑對其有一定的腐蝕性，故使用時要留意，柱及連接管內(nèi)不能長時間存留此類溶劑，以避免腐蝕。
b、柱填料：
液相色譜柱的分離作用是在填料與活動相之間進(jìn)行的，柱子的分類是依據(jù)填料類型而定。
正相柱：多以硅膠為柱填料。根據(jù)外型可分為無定型和球型兩種，其顆粒直徑在3-10 μm的范圍內(nèi)。另一類正相填料是硅膠表面鍵合-CN，-NH2等官能團(tuán)即所謂的鍵合相硅膠。
反相柱：主要是以硅膠為基質(zhì)，在其表面鍵合十八烷基官能團(tuán)(ODS)的非極性填料。也有無定型和球型之分。
常用的其他的反相填料還有鍵合C8、C4、C2、苯基等，其顆粒粒徑在3-10 μm之間。
2，色譜柱的安裝：
a、拆開柱包裝盒，確認(rèn)色譜柱的類型、尺寸、出廠日期以及柱內(nèi)貯存的溶劑。
b、擰下柱兩端接頭的密封堵頭放回包裝盒供備用。
c、按柱管上標(biāo)示的活動相流向，將色譜柱的進(jìn)口端通過連接管與進(jìn)樣閥出口相連接(如條件答應(yīng)，建議在柱前使用保護(hù)柱)；柱的出口與檢測器連接。連接管是外徑為1.57mm、內(nèi)徑為0.1-0.3mm的不銹鋼管。連接管的兩端均有空心螺釘及密封用壓環(huán)。在接管時一定要想法降低柱外死體積。連接管通過空心螺釘、壓環(huán)后盡量用力插到底，然后順時針擰緊空心螺釘，直到擰不動為止，再用扳手繼續(xù)順時針擰1／4-1／2圈，切記不要用力過大。如色譜柱通過活動相加壓后有漏液現(xiàn)象，請用扳手繼續(xù)順時針擰1／4圈，直至不漏液為止。
二、液相色譜柱的使用：
色譜柱在使用前，好進(jìn)行柱的性能測試，并將結(jié)果保存起來，作為今后評價柱性能變化的參考。但要留意：柱性能可能由于所使用的樣品、活動相、柱溫等條件的差異而有所不同；另外，在做柱性能測試時是按照色譜柱出廠報告中的條件進(jìn)行(出廠測試所使用的條件是佳條件)，只有這樣，測得的結(jié)果才有可比性。
1、樣品的前處理：
a、好使用活動相溶解樣品。
b、使用予處理柱除往樣品中的強(qiáng)極性或與柱填料產(chǎn)生不可逆吸附的雜質(zhì)。
c、使用0.45μm的過濾膜過濾除往微粒雜質(zhì)。
2、活動相的配制：
液相色譜是樣品組分在柱填料與活動相之間質(zhì)量交換而達(dá)到分離的目的，因此要求活動相具備以下的特點：
a、活動相對樣品具有一定的溶解能力，保證樣品組分不會沉淀在柱中(或長時間保存在柱中)。
b、活動相具有一定惰性，與樣品不產(chǎn)生化學(xué)反應(yīng)(特殊情況除外)。
c、活動相的黏度要盡量小，以便在使用較長的分析柱時能得到好的分離效果；同時降低柱壓降，延長液體泵的使用壽命(可運(yùn)用進(jìn)步溫度的方法降低活動相的黏度)。

d、活動相的物化性質(zhì)要與使用的檢測器相適應(yīng)。如使用UV檢測器，好使用對紫外吸收較低的溶劑配制。
e、活動相沸點不要太低，否則輕易產(chǎn)生氣泡，導(dǎo)致實驗無法進(jìn)行。
f、在活動相配制好后，一定要進(jìn)行脫氣。除往溶解在活動相中的微量氣體既有利于檢測，還可以防止活動相中的微量氧與樣品發(fā)生作用。
3、活動相流速的選擇：
因柱效是柱中活動相線性流速的函數(shù)，使用不同的流速可得到不同的柱效。對于一根特定的色譜柱，要追求佳柱效，好使用佳流速。對內(nèi)徑為4.6mm的色譜柱，流速一般選擇1ml／min，對于內(nèi)徑為4.0mm柱，流速0.8ml／min為佳。
當(dāng)選用佳流速時，分析時間可能延長?？刹捎酶淖兓顒酉嗟南礈鞆?qiáng)度的方法以縮短分析時間(如使用反相柱時，可適當(dāng)增加甲醇或乙腈的含量)。
留意：
a．由于甲醇廉價，對于反相柱推薦使用甲醇體系(必須使用乙腈的場合除外)。
b．對于正相柱推薦使用沸程為30-60℃的石油醚或提純后的己烷作活動相，沒有提純的己烷不得使用。用水好使用超純水(電阻率大于18兆歐)，往離子水及雙蒸水中含有酚類雜質(zhì)，有可能影響分析結(jié)果。
c．含水活動相奸在實驗前配制，尤其是夏天使用緩沖溶液作為活動相不要過夜。好加進(jìn)*，防止細(xì)菌生長。
d．活動相要求使用0.45 μm濾膜過濾，除往微粒雜質(zhì)。
e．使用HPLC級溶劑配制活動相，使用合適的活動相可延長色譜柱的使用壽命，進(jìn)步柱性能。
4、柱性能測試：
啟動液相色譜儀：
a、活動相流速設(shè)定為1ml／min。
b、UV檢測器波長設(shè)定為254nm。
使用出廠測試時使用的活動相組成及測試樣品。
記錄并計算測試結(jié)果。
*參考(標(biāo)準(zhǔn)JB5226-91)液相色譜儀測試用標(biāo)準(zhǔn)色譜柱。

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液相色譜柱使用及保養(yǎng)